Coloración Gram

 

La Coloración Gram, debe ser la tinción más usada en microbiología, tiene por finalidad observar morfología bacteriana y taxonomía; pero hay diferentes variantes así tenemos, 

• Gram Clásico.
• Gram-Kopelov.
• Gram-Hucker.

Yo he tenido la oportunidad de evaluar las dos primeras y me inclino por usar Gram-Kopelov, para mí cuáles son las ventajas.

• Que se pueden acortar los tiempos de coloración que se puede realizar por 10 segundos.
• A la decoloración le damos unos 30 segundos.
• Para el colorante de contraste Fucsina Básica, su intensidad más brillante que la safranina más opaca favorece un mejor contraste en la observación.

La modificación de Kopelov fue el uso de sustancias alcalinas facilitan la penetración del cristal violeta, en este caso usamos Bicarbonato de sodio.

La otra variante es que no usa lugol sino una solución de yodo.

Mayormente las muestras son fijadas al calor, con cuidado de preferencia se puede contar con un equipo nacional que regula un termostato y se puede escoger la temperatura a usar.

De allí es importante la preparación de los colorantes:

1. Cristal Violeta

   
   

   a.- Cristal violeta de Kopelov:

   
   

         Cristal Violeta 1g.

         Agua destilada 100cc.

2. Bicarbonato de Sodio.

   
   

   a.- Bicarbonato de Sodio de Kopelov:

         Bicarbonato de Sódio 5g.

         Agua destilada 100cc.

3. Solución de Yodo.
   
   

   a.- Solución de Yodo de Kopelov.

         Yodo metálico 10g.

         Hidróxido de Sódio 1N 50cc.

         Agua destilada 500cc.

4. Decolorantes.
   
   
   

   a.- Decolorante de Kopelov.

          Alcohol etílico 96%.

          Acetona q. p. 50%.

          Mezclar partes iguales.

          Combinar en botellas de vidrio oscuras, rotular con la fecha de 1 año   de expiración y almacenar a temperatura ambiente.

            Rápidos: Acetona (grado reactivo)

5. Colorante de contraste:
   
   

   a.- Fucsina básica (0.8, 0.1, ó 2%) de Kopelov.

         Fucsina básica 0.1g.

         Agua destilada 100cc.

Los Laboratorios por las facilidades ya no compran los colorantes en polvo para la preparación, sino colorantes listos para usar, pero en mi opinión las casas comerciales deberían indicar cómo ha sido preparado cada frasco para poder realizar una trazabilidad del funcionamiento con el tiempo de coloración recomendado por el fabricante y también el uso de cepas atcc para realizar un control semanal de la coloración y performance de los colorantes.

También tenemos que la acetona es un producto controlado por su uso en el narcotráfico de allí la dificultad de conseguir, y tal vez el decolorante no sea preparado en las proporciones adecuadas para que cumpla su función.

No olvidar que si se observa precipitados o sedimentos, los colorantes deben ser filtrados.

Procedimiento que realizamos para Coloración Gram-Kopelov.

1. Cubrir la lámina portaobjeto que contiene el frotis con cristal violeta que cubra la lámina, previamente rotulada con lápiz de cera, el plumón indeleble se va a borrar con el alcohol acetona y agregar 3 gotas de bicarbonato de sodio, una gota al centro y otra a cada extremo. Desde ese momento contar 10 segundos.
2. Lavar la lámina con agua de caño.
3. Agregar Solución de yodo por 10 segundos.
4. Lavar la lámina con agua de caño.
5. Decolorar con alcohol-acetona por 30 segundos.
6. Lavar la lámina con agua de caño.
7. Agregar fucsina básica por 10 segundos.
8. Lavar la lámina con agua de caño.
9. Dejar secar.

Continuará.